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PCR實(shí)操避坑分享
發(fā)布時間:2025-09-28
前段時間和大家分享了PCR反應(yīng)的過程控制,今天來聊聊PCR的操作手法。實(shí)操可以說是整個PCR實(shí)驗流程中最容易被忽略卻又至關(guān)重要的一環(huán)。下面小編就來分享一下自己當(dāng)初的一些經(jīng)驗心得,僅代表個人看法。先說體系配置(各組分分開,非預(yù)混液)。配置前先計算好所需要的各組分體積,統(tǒng)一配置好后再...
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2022
3-10
迷你梯度PCR儀常用的五種分析方法
迷你梯度PCR儀的梯度溫度控制是一項可有助于PCR中引物退火優(yōu)化的功能。梯度設(shè)定的目的是在模塊之間實(shí)現(xiàn)變化的溫度,通過每列之間≥2°C的間隔溫度升降,使得可同時對于一系列的溫度進(jìn)行測試以獲取引物退火溫度。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計帶有三個或更...
2022
3-1
三槽梯度PCR儀科普知識大全,你真不一定都懂
三槽梯度PCR儀溫度的準(zhǔn)確性可能會對PCR的成敗與否起決定性作用,因為PCR的三個主要步驟都依賴于溫度。類似地,加熱模塊上孔與孔之間的溫度一致性對于獲取可靠而可重復(fù)的PCR結(jié)果也是至關(guān)重要的。因此,所使用的PCR儀能在模塊之間準(zhǔn)確到達(dá)設(shè)定的...
2022
1-21
雙槽梯度PCR儀應(yīng)該這樣使用
雙槽梯度PCR儀的反應(yīng)原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性一退火(復(fù)性)--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)間后,使模板DN...
2022
1-17
熒光定量基因擴(kuò)增儀使用必須遵守下面的基本安全措施
熒光定量基因擴(kuò)增儀在操作、維護(hù)和修理本儀器的所有階段,都必須遵守下面的基本安全措施。如果不遵守這些措施或本說明書其它地方指出的警告,便可能影響到儀器提供的保護(hù)。同時,這也會破壞設(shè)計和制造的安全標(biāo)準(zhǔn)以及儀器的預(yù)期使用范圍。a)儀器接地為了避免...
2022
1-11
熒光定量PCR的理論依據(jù)是什么?
熒光定量PCR在反應(yīng)中,引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì),隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化。從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線...
2022
1-4
二維梯度PCR的應(yīng)用領(lǐng)域有哪些?
PCR技術(shù)從發(fā)明至今已有二十多年的時間,用于PCR實(shí)驗的儀器不斷的推陳出新。然而PCR的基本過程沒有太大變化,包括變性-退火-延伸這三步。這其中包括反應(yīng)條件、使用試劑的量甚至是引物等,很多研究者在進(jìn)行PCR優(yōu)化時都會考慮退火溫度的優(yōu)化,這時...
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